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dna分子與載體分子連接是克隆過程中的重要環節之一，方法有：1粘性末端連接。dna片段兩端的互補堿基順序稱之為粘性末端，用同一種限制性內切酶消化dna可產生相同的粘性末端。在連接酶的作用下可恢復原樣，有些限制性內切酶雖然識別不同順序，卻能產生相同末端。2平頭末端連接，用物理方法制備的dna往往是平頭末端，有些酶也可產生平頭末端。平頭dna片段可在某些dna連接酶作用下連接起來，但連接效率不如粘性末端高;3同聚寡核苷酸末端連接。4人工接頭分子連接，在平頭dna片段末端加上一段人工合成的、具有某一限制性內切酶識別位點的寡核苷酸片段，經限制性內切酶作用后就會產生粘性末端。

連接反應需注意載體dna與dna片段的比率。以λ或cos質粒為載體時。形成線性多連體dna分子，載體與dna片段的比率高些為佳。以質粒為載體時。形成環狀分子，比率常為1∶1。

最后是引入寄主細胞。

常用兩種方法：1轉化或轉染。方法是將重組質粒dna或噬菌體dnam13與氯化鈣處理過的宿主細胞混合置于冰上，待dna被吸收后鋪在平板培養基上，再根據實驗設計使用選擇性培養基篩選重組子，通常重組分子的轉化效率比非重組dna低，原因是連接效率不高，有許多dna分子無轉化能力，而且重組后的dna分子比原載體dna分子大，轉化困難。2轉導，病毒類侵染宿主菌的過程稱為轉導，一般轉導的效率比轉化高。

此時的李安，操控著墨蓮人，不斷的收集材料，進行著研究。

三級文明，分子克隆有很多的作用！

分子克隆技術是發展起來的不久，它的出現和應用開辟了分子遺傳學研究的新領域。打開了人類了解、識別、分離和改造基因，創造新物種的大門。它的成就對于工業、農牧業和醫學產生深遠影響，并將為解決世界面臨的能源、食品和環保三大危機開拓一條新的出路。

利用分子克隆技術已將胰島素。人、牛和雞的生長激素、人的干擾素、松弛素、促紅細胞生長激素、乙型肝炎病毒抗原和口蹄疫病毒抗原的基因制成工程菌，利用發酵工業進行了大規模生產。還可提高微生物本身所產生的蛋白酶類和抗生素類藥物的產量。

通過遺傳工程看到癌細胞具有逆轉為正常細胞的可能性。例如sv40病毒引起的小鼠腫瘤細胞，在溫度高時可逆轉為正常細胞。為治療半乳糖血癥，用帶有大腸桿菌乳糖操縱子的λ噬菌體去感染半乳糖血癥患者的離體培養細胞，發現這種細胞的半乳糖苷酶達到了正常水平，并確實能代謝半乳糖。

通過遺傳工程看到癌細胞具有逆轉為正常細胞的可能性，例如sv40病毒引起的小鼠腫瘤細胞，在溫度高時可逆轉為正常細胞。為治療半乳糖血癥，用帶有大腸桿菌乳糖操縱子的λ噬菌體去感染半乳糖血癥患者的離體培養細胞。發現這種細胞的半乳糖苷酶達到了正常水平，并確實能代謝半乳糖。

植物遺傳工程對提高農作物的產量、培育新的農作物品種提供了可能。有許多外源基因導入植物獲得成功。

一個有關于李安的軀體正在不斷的形成。。

“這是一個多順反子，在這里，在這里！為了自己的身體變得完美！”

既然是建造自己的身體，李安盡量讓自己變得完美。

在原核細胞中，通常是幾種不同的ma連在一起，相互之間由一段短的不編碼蛋白質的間隔序列所隔開，這種ma叫做多順反子ma。順反子的概念來自遺傳學中的順反重組試驗，是確定交換片段究竟在一個基因內還是屬于兩個基因的試驗，簡言之。一個順反子就是一個基因，多順反子就是多個基因。真核生物中也有多順反子，比如c。elegans共有13500個基因。約25%的是多順反子。

ma存在于原核和真核生物的細胞質及真核細胞的某些細胞器如線粒體和葉綠體中。a病毒和a噬菌體中的a既是遺傳信息的載體又具有ma的功能。生物體ma種類的多少與生物進化水平有關，高等生物所含的遺傳信息多，ma的種類也多。生物體內某種ma的含量根據需要而有不同，如5齡蠶后部絲腺體的主要任務是快速合成大量絲心蛋白，因而編碼絲心蛋白的ma含量特別多。有些細菌需要不斷多順反子適應外部環境，其體內編碼某些誘導酶的ma的含量也較多。

原核和真核生物ma有不同的特點：1原核生物ma常以多順反子見的形式存在，即一條ma鏈編碼幾種功能相關聯的蛋白質。真核生物ma一般以單順反子的形式存在，即一種ma只編碼一種蛋白質。2原核生物ma的轉錄與翻譯一般是偶聯的，即轉錄尚未完畢。蛋白質的轉譯合成就已開始。真核生物轉錄的ma前體則需經后加工，加工為成熟的ma與蛋白質結合生成信息體后才開始。工作信息體中蛋白質與a之比約為3。3原核生物ma半壽期很短，一般為幾分鐘。最長只有數小時a噬菌體中的a除外。真核生物ma的半壽期較長，如胚胎中的ma可達數日。4原核與真核生物ma的結構特點也不同。

一級結構與功能的關系：原核生物ma一般5端有一段不翻譯區，稱前導順序，3端有一段不翻譯區，中間是蛋白質的編碼區，一般編碼幾種蛋白質。如大腸桿菌乳糖操縱子ma編碼3條多肽鏈;色氨酸操縱子ma編碼5條多肽鏈。也有單順反子形式的細菌ma，如大腸桿菌脂蛋白ma。原核生物ma分子中一般沒有修飾核苷酸，也沒有5端帽子結構和3端聚腺苷酸尾巴。在原核生物ma的起始密碼子aug附近5方向上游的一小段長短不等的順序，含有較多的嘌呤核苷酸，被稱為sd順序。未完待續

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